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氨基甲酸甲酯檢測試劑盒

氨基甲酸甲酯檢測試劑盒

本試劑盒僅供研究使用。

1 使用目的:

本試劑盒用于雞蛋、牛奶 肉類(lèi)組織(如雞、牛肉和豬肉)中氨基甲酸甲酯(methyl carbomate)殘留的定量檢測。

2 實(shí)驗原理

本試劑盒采用直接競爭ELISA 方法,在微孔板包被有氨基甲酸甲酯(methyl carbomate偶聯(lián)抗原,加入氨基甲酸甲酯(methyl carbomate)標準品或樣品,游離氨基甲酸甲酯(methyl carbomate)與微孔條上預包被的氨基甲酸甲酯(methyl carbomate偶聯(lián)抗原互相競爭抗氨基甲酸甲酯(methyl carbomate抗體酶標記物,用TMB 底物顯色,加入終止液后顏色由藍色變?yōu)辄S色,用酶標儀在450nm 波長(cháng)下進(jìn)行檢測,吸光值與樣品中氨基甲酸甲酯(methyl carbomate含量成反比,通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中氨基甲酸甲酯(methyl carbomate的含量。

3 試劑盒組成

3.1 預包被的氨基甲酸甲酯(methyl carbomate偶聯(lián)抗原的可拆酶標板:1 塊(12 孔×8 條)。

3.2 氨基甲酸甲酯(methyl carbomate標準品:6 瓶(1ml/瓶)

3.3 抗氨基甲酸甲酯(methyl carbomate抗體酶結合物:1 瓶(6ml)。

3.4 顯色液A:1 瓶(6ml)。

3.5 顯色液B:1 瓶(6ml)。

3.6 終止液:1 瓶(6ml),2M 硫酸。

3.7 樣本稀釋液:1 瓶(10×, 6ml),用于樣品稀釋用。

3.8 濃縮洗滌液:1 瓶(20×,20ml),用于洗板。

3.9 說(shuō)明書(shū)一份。

4 需要而未提供的材料

4.1 設備

4.1.1波長(cháng)450nm酶標儀。

4.1.2粉碎機。

4.1.3量筒。

4.1.4振蕩器。

4.1.5漏斗。

4.1.6Whatman No 1或相當的濾紙。

4.1.7微量移液器。

4.2 試劑

4.2.1去離子水或蒸餾水。

4.2.2 甲醇。

5 貯存

5.1 試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍

5.2 未用完的微孔板應該密封干燥保存

6 注意事項

6.1 使用試劑盒前請仔細閱讀說(shuō)明書(shū)。

2

6.2 不要使用過(guò)期試劑盒。

6.3 試劑盒使用前,將試劑恢復至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時(shí)。

6.4 標準品中含有黃曲霉素,使用時(shí)應特別注意,操作時(shí)應帶手套。

6.5 終止液中含有硫酸,使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。

6.6 不同標準品、樣品所用吸頭不能混用,否則會(huì )影響試驗結果。

6.7 不同批號試劑盒中的試劑不得混用;不同標準品、樣品所用吸頭不得混用,否則會(huì )影響

實(shí)驗結果。

6.8 稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會(huì )影響實(shí)驗結果

6.9 混合試劑時(shí)應避免起泡。

7 工作液準備

7.1 氨基甲酸甲酯(methyl carbomate標準品溶液:備用

7.2 濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用

7.3 樣本稀釋液:備用

7.3 顯色劑:已備用,避免光線(xiàn)直照

7.4 反應終止液:已備用

8 樣品處理程序(樣品在提取過(guò)程中,要嚴格按說(shuō)明書(shū)操作,提取過(guò)程中應準確稀釋?zhuān)駝t

會(huì )出現結果不準確,樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存)

8.1取10g粉碎的樣品,加 20ml 70%甲醇溶液

8.2強力振蕩3分鐘

8.3用Whatman No 1濾紙過(guò)濾

8.4取25μl處理后的樣品,加入25μl樣本稀釋液于反應孔中(樣本稀釋倍數為2)

9 酶免分析步驟

9.1 實(shí)驗須知

9.1.1 實(shí)驗開(kāi)始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫(25±2℃),時(shí)間約2小時(shí)?;販刂潦?/p>

溫(25±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存

注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的精確度和準確度。

9.1.2 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存

9.1.3 請不要改變分析程序

9.1.4 請使用精確的微量移液器

9.1.5 操作一旦開(kāi)始,請不要中斷任何程序

9.1.6 ELISA結果的可重復性極大程度的取決于操作程序,請嚴格按照要求操作

9.1.7 為避免交叉污染,每個(gè)標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣

9.1.8 加樣時(shí)請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內表面

9.2 分析步驟

9.2.1 預先進(jìn)行編號,標記B0、標準品和樣品的位置,推薦進(jìn)行雙孔檢測

9.2.2 取所需數量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存

9.2.3 樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(10×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)

9.2.4 在B0孔中加入50μl0.0 ng/ ml標準品溶液

9.2.5 在各標準孔中加入50μl的標準品溶液

9.2.6 在各樣品孔中加入50μl樣品溶液

9.2.7 在所有孔中加入50μl的抗黃曲霉素B1抗體酶結合物

9.2.8 輕輕晃動(dòng)反應板幾秒鐘。

9.3 37℃溫浴30min (溫浴過(guò)程中不時(shí)輕拍反應板,可以減少雙孔誤差)

9.3.1 甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,最后一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。

9.4 反應

9.4.1 洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50μl顯色液A,再加 50μl顯

色液B;輕微晃動(dòng)反應板使之徹底混勻

9.4.2 37℃溫浴10min

9.4.3 每孔中加入50μl終止液,混勻

9.4.4 在450nm下檢測吸光度,結果在5min內讀取。

10 結果計算

10.1定量分析

10.1.1所獲得的每個(gè)濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以第一個(gè)標準(0標準)

的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0μg/L標準溶液的平均吸光度值

10.1.2以氨基甲酸甲酯(methyl carbomate濃度的對數值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標準曲線(xiàn)圖。根

據樣品百分吸光度值,可從曲線(xiàn)上得到對應點(diǎn)的橫坐標,即為氨基甲酸甲酯(methyl carbomate濃度的對數

值,求得反對數即為測定液中氨基甲酸甲酯(methyl carbomate濃度C

10.1.3由于樣品經(jīng)過(guò)了預先稀釋?zhuān)虼烁鶕藴是€(xiàn)所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數。

10.2 半定量測定

10.1.1目測半定量測定:首先選擇一個(gè)適當的標準液與樣品同運行,根據樣品與標準品吸光

度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。

10.1.2儀器半定量測定:首先選擇一個(gè)適當的標準液與樣品同運行,根據樣品與標準品顏色

深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。


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